细胞学堂 | 直击细胞培养试剂四大疑难问题

试剂是培养细胞必不可少的“装备”，在使用这些试剂的过程中，总会遇到各种各样的问题。基于此，小普将试剂的常见问题及解决方法总结如下。

10瓶双抗同时在-20℃的条件下冻存，9瓶冻上了，1瓶却没冻上

可能是过冷现象。因为水中含有许多的盐类物质，在标准状况下，水的结冰点是0℃，但因为盐类物质即使0℃以下也不能结冰，这就是过冷现象。由于水里面比较纯净，在不震荡的情况下，即使稍微低于零度，也不会马上结冰。

双抗拿出来的时候由于震荡，使水的稳定状态改变，会很快结冰；产品打开时，由于温差，水极度放热，温度极剧下降，也容易导致结冰。

MEM培养基高压灭菌后底部出现沉淀

制备基础培养基时，添加组分的顺序可能导致不可溶分子的形成。钙盐尤其容易沉淀，比如CaCl₂和MgSO₄在溶液中反应产生CaSO₄晶体。高压灭菌和pH值不稳定会加剧这一问题，高温高压条件会让内部的盐溶液和一些氨基酸、维生素等发生化学反应，产生沉淀。

1. 逐个添加其它培养基组分之前，用去水离子水单独溶解CaCl₂；或者添加缓冲液避免渗透压的变化;

2. 高压灭菌会使培养基内的氨基酸等成分被破坏，基础培养基大多数营养物质失活，已不能使用，0.22μm过滤除菌即可。

1. 培养细胞时一定要按照说明书要求选择最佳的培养基储存和操作方法;

2. 避免反复冻融。

图1. 培养基产生沉淀

含酚红的胰酶冷冻后变黄

由于该胰酶溶液的溶剂是PBS，为磷酸盐缓冲体系，在冷冻后会变成浅黄色。同时若该产品采用的是干冰运输方式，在运输过程中少量CO2可能会进入到溶液中导致PH值略微下降。

该种浅黄色的胰酶溶解后依然会变成橙红色液体，可以正常使用；若完全溶解后还是黄色，该种黄色的溶液依然可以使用或者也可以采用无菌的2M氢氧化钠溶液对PH进行微调后使用，或者可以联系厂家更换。

图2. 胰酶冷冻后变黄

1. 由于不同的组织或者细胞对胰酶的作用反应不一样，操作时应根据实际情况，确定最佳消化时间；

2. 消化时间需适宜，过长或者过短都会影响细胞贴壁和生长状况；

3. 不宜长时间放置于室温环境或在4℃条件下长期保存；

4. 在2℃-8℃条件下解冻，摇匀后使用，切忌反复冻融，用量较少时建议分装冻存。

L-谷氨酰胺溶液溶解后析出

在2℃-8℃的条件下解冻后，溶液变成乳液状属正常现象，该情况系L-谷氨酰胺受温度影响导致溶解度降低而析出。

将该溶液表面用75%酒精擦拭摇匀后放入37℃培养箱，30-40分钟后溶液可以溶解至澄清透明，最后摇匀使用，使用过程中切忌反复冻融，用量较少时建议分装冻存。

图3. L-谷氨酰胺溶液溶解后析出

1. 不宜长时间放置于室温环境或在4℃条件下长期保存；

2. 根据需要稀释后使用。