【显微科普】什么是暗场显微观察？

右：蚕幼虫的气孔和气管。使用透射光显微镜在暗场条件下照明时，细微的碎木片会呈现出异常美丽的外观。
左：蝴蝶。由于该目成员的翅膀鳞片类型非常丰富，因此蝴蝶成为昆虫界最为色彩绚丽的成员之一。数字图像展示了装饰在蝴蝶翅膀大部分表面的众多细微鳞片。翅膀上的鳞片采用位于载物台下方的暗场聚光镜照明，图像以低倍率（50x）捕捉。

通常情况下，在适于暗场照明成像的观察对象看上去非常绚丽。在明场显微观察中本身对比度非常低的标本往往在暗场观察时非常耀眼夺目。

暗场照明特别适合显示轮廓、边缘、边界和折射率梯度。暗场照明的理想候选对象包括微小的水生生物、硅藻、小昆虫、骨、纤维、头发、未染色的细菌、酵母、组织培养细胞和原生动物。

适合暗场观察的非生物标本则包括矿物和化学晶体、胶体颗粒、粉尘计数标本、以及包含细小夹杂物、孔隙率差异或折射率梯度的聚合物和陶瓷薄片。

左：这张绚丽的硅藻蛛网藻暗场显微图像由Mortimer Abramowitz使用奥林巴斯显微镜拍摄的样品使用高数值孔径暗场聚光镜照明，并在显微镜载玻片与物镜和聚光镜顶透镜之间放置浸油。

中：椴木。经过染色的标本通常是极佳的暗场显微观察对象，其所生成的图像在深色背景上呈现出绚丽色彩。该显微照片为在暗场照明下的椴木染色薄切片。

右：液晶DNA。这种高度浓缩的DNA溶液经历一系列液晶相变后，形成紧密堆积的六方相。该显微照片使用10倍物镜复合光学显微镜在暗场照明条件下拍摄而成。

遗憾的是，暗场照明对于显示内部细节的优势并不突出。如果想要充分利用暗场照明，还需要考虑其他条件。

暗场显微观察具有诸多优点。其深色的背景能够提供较高的对比度，即使在效果不佳的背景上也能够轻松观察标本。由于很多明场实验室用显微镜均可配置用于暗场照明，因此该技术很容易入手。除了显微观察的优势之外，在样品经过优雅照明的情况下，暗场图像可以看起来更像是一幅艺术作品。