1打开image J软件;
![图片](/__local/9/10/46/58396AC4202CA38A5048C28CAB3_01E4704A_A259.png?e=.png)
(图片1 image J工作界面)
2 打开图片所在位置:file- open- 找到需要分析的图片;
![图片](/__local/6/67/9E/1F58624DC51081B1BB3E2E426C0_65AB1EA6_10569.png?e=.png)
(图2 image J打开图片后呈现界面)
3 将图片颜色通道分割:image- color- split channels(颜色将被切割为red- green- blue三个通道),本次分析的蓝色通道(blue),其它颜色通道可以关闭,或者直接选择蓝色通道进行分析即可;
![图片](/__local/9/49/FA/FA50923C0D4DCC9AE1D392B614B_69793366_B2C2.png?e=.png)
(图3 image J分割图片为三个颜色通道设置)
![图片](/__local/F/59/F4/280F4307826CCC904A38EA51923_20E8B575_9F80.png?e=.png)
(图4 颜色通道被分割为blue- green- red,只需选择要分析的图层即可)
4手动调节阈值
4.1手动调节设置:image- adjust- threshold
![图片](/__local/6/E2/4C/8A51F3BC0860ED7FD268F1E9A3E_2B9EA373_E8CF.png?e=.png)
(图5 手动设置图片阈值设置操作)
4.2 手动调节阈值:根据红色箭头所指位置调动阈值,保证着色部分被全部覆盖,黑色背景(Dark background 红框)务必选中;
![图片](/__local/B/A2/19/19578D1F336773C4E4E7A1355EA_5EA1B78D_10523.png?e=.png)
(图6 手动调节操作及设置)
5 自动调节阈值(建议选中自动,避免人为因素)
5.1 自动调节阈值:analyze- set measurements
![图片](/__local/B/CA/AD/8093E5BC3C77FCFCFF1B79417FF_524D548A_64FC.png?e=.png)
(图7 自动调节阈值设置操作)
5.2 自动调节阈值参数设置,勾选下列红框部分;
![图片](/__local/5/88/13/6C632F74DAA31021B8D41691078_147430C2_C592.png?e=.png)
(图8 自动测定设置参数)
6 计算数值:analyze- measure (Ctrl + M建议记住,后期直接使用快捷键在批量计算很实用);
![图片](/__local/F/F7/3A/50D2A33247184DCD6FF18D3A002_7E17068A_55F0.png?e=.png)
(图9 测量荧光数值操作)
7 数据导出:results界面的mean及为我们需要的荧光值,执行file- save as即可保存数据;
![图片](/__local/0/5B/29/B8F019E36816E9F83AC16A84AB8_9344008F_5218.png?e=.png)
(图9 数值结果) (图10 导出数值方式)