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荧光标记细胞流程
发布时间:2022-09-21 发布者: 浏览次数:

荧光标记细胞流程


1. 培养细胞,分别取1、3、7天样品(看实际情况需要)
2. 样品用PBS清洗2次
3. 取样品置于戊二醛中固定(至少1小时以上),一般可以取完7天的样再一起做荧光标记
4. 吸走戊二醛,加入PBS清洗3次,每次5 min
5. 用PBS配10 mg/ml的BSA溶液,每个样品加1ml,于37℃下孵育30min以上
6. 吸走BSA溶液,加入PBS清洗3次,每次5 min
7. 用PBS配一抗溶液(actin),按体积比actin:PBS=1:50稀释,每个样品加50l,仅滴于样品表面(具体用量可以自行选择),于37℃下孵育30min以上
8. 吸走actin,加入PBS清洗3次,每次5 min
9. 用PBS配生物素标记的二抗溶液(IgG),按体积比IgG:PBS=1:100稀释,每个样品加50l,仅滴于样品表面(具体用量可以自行选择),于37℃下孵育30min以上
10. 吸走IgG,加入PBS清洗3次,每次5 min
11. 用PBS配荧光素(FITC-IgG),按体积比FITC-IgG:PBS=1:100稀释,每个样品加50l,仅滴于样品表面(具体用量可以自行选择),于37℃下孵育30min以上
12. 吸走FITC-IgG,加入PBS清洗3次,每次5 min
13. 用荧光显微镜拍照

注:1、若在细胞培养箱中于37℃下孵育,则上述操作步骤都应在超净台上进行,且要换用新的24孔板来装样品,PBS配的BSA溶液应通过滤膜过滤灭菌。若在一般实验台上操作,则需要在室温下孵育2小时以上。
2、PBS配方和细胞培养中所用的PBS配方一致。


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